Флуоресценттик резонанстык энергияны өткөрүү (FRET)
Флуоресценциялык резонанстык энергияны өткөрүү (FRET) – молекулалар аралык электр жуптарынын өз ара аракеттешүүсү аркылуу донордук дүүлүккөн абалдагы энергия акцептордук дүүлүккөн абалга өтүүчү радиациялык эмес энергияны берүү процесси.Бул процесс фотондорду камтыбайт жана ошондуктан радиациялык эмес.Бул анализдин артыкчылыктары тез, сезимтал жана жөнөкөй.
FRET анализинде колдонулган боёк бирдей болушу мүмкүн.Бирок көпчүлүк колдонмолордо, чынында, ар кандай боектор колдонулат.Кыскача айтканда, жаркыраган резонанстык энергиянын берилиши донордук топ дүүлүккөндө донордон (1-боёк) акцепторго (2-боёк) жуп диполдун өтүшү.Жалпысынан Донор флюорофор тобунун эмиссия спектри Акцептор тобунун жутуу спектри менен дал келет."Эки флюорофордун ортосундагы аралык ылайыктуу болгондо (10 — 100 А), флюорофор энергиясынын донордон акцепторго өтүшүн байкоого болот."Энергияны берүү ыкмасы рецептордун химиялык түзүлүшүнө жараша болот:
1. Молекулярдык термелүүгө айланат, башкача айтканда, энергияны өткөрүүнүн жаркыраган жарыгы жок болот.(рецептор жарык өчүргүч болуп саналат)
2. Эмиссия кабылдагычтын өзүнө караганда интенсивдүү, натыйжада экинчилик флуоресценттик спектрде кызыл жылышуу пайда болот».(Рецепторлор жарык берүүчү).
Донордук топ (EDANS) жана акцептордук ген (DABCYL) АИВ протеазасынын табигый субстраты менен бирдей байланышкан, ал эми субстрат ажыратылбаганда, DABCYL EDANS'ты квенлге түшүрүп, андан кийин фторга чейин аныкталбай калат.HIV-1 протеазасы ажыратылгандан кийин, EDANS мындан ары DABCYL тарабынан өчүрүлбөйт жана EDANS люциферазалары кийинчерээк аныкталышы мүмкүн.Протеаза ингибиторлорунун болушу EDANS флуоресценттик интенсивдүүлүгүнүн өзгөрүшү менен көзөмөлдөнүшү мүмкүн.
FRET пептиддери пептидаздын өзгөчөлүгүн изилдөө үчүн ыңгайлуу куралдар болуп саналат.Анын реакция процесси тынымсыз көзөмөлдөнүшү мүмкүн болгондуктан, ферменттин активдүүлүгүн аныктоо үчүн ыңгайлуу ыкманы камсыз кылат.Донор/акцептор тарабынан пептиддик байланыштардын гидролизинен кийин пайда болгон жылтыл наномолдук концентрацияда ферменттин активдүүлүгүнүн өлчөмүн камсыз кылат.FRET пептиди бүтүн болгондо, ал ички жарк этүүнүн капыстан жоголуп кетишин көрсөтөт, бирок донор/акцептордун карама-каршысындагы ар кандай пептиддик байланыш үзүлгөндө, ал жаркыраган жаркылдайт, аны үзгүлтүксүз аныктоого болот жана андан кийин ферменттин активдүүлүгүн сандык эсептөөгө болот.
Посттун убактысы: 14-август-2023